實(shí)驗(yàn)條件的選擇

在 ELISA 中，選擇各種實(shí)驗(yàn)條件很重要，包括：

(1)固相載體的選擇：許多物質(zhì)都可以用作固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、纖維素等?？梢允强装?、試管、珠子等形式，常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。無論是何種載體，使用前都可以進(jìn)行篩選：包被等量的抗原，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)。

(2)包被抗體(或抗原)的選擇：當(dāng)抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度好，一般要求pH在9.0～9.6之間在吸附過程中。吸附溫度、時(shí)間和蛋白質(zhì)的量也有一定的影響，一般4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的最佳濃度需要滴定：即在包被不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）后，在其他測(cè)試條件相同的情況下觀察陽性樣品的OD值.選擇 OD 值最高、蛋白質(zhì)含量最少的濃度。對(duì)于大多數(shù)蛋白質(zhì)，通常為 1-10 μg/ml。

（3）酶標(biāo)抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法滴定初始效價(jià)（見酶標(biāo)抗體部分）。然后固定其他條件或采用“方陣法"（包被材料、待測(cè)樣品對(duì)照品和酶標(biāo)抗體處于不同稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中準(zhǔn)確滴定工作濃度。

(4)酶底物和氫供體的選擇：氫供體的選擇要求便宜、安全、顯色反應(yīng)明顯，但本身是無色的。一些供氫體（如OPD等）具有潛在的致癌作用，應(yīng)予以保護(hù)。有條件的應(yīng)選用非致癌、高靈敏度的供氫體，如TMB、ABTS等，都是比較滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿停止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間為10-30分鐘。底物溶液必須新鮮配制，特別是在使用前應(yīng)立即加入 H2O2。

安全性

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

4． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

5． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

6． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。

8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9． 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

10． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

11． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

12． 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

同產(chǎn)品展示：