大鼠Ⅱ型膠原抗體 （ELISA）試劑盒

主要設備

試劑

（1）　包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）:

Na2CO3 1.59克

NaHCO3　 2.93克

加蒸餾水至1000ml

（2）　洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M

KH2PO4 　0.2克

Na2HPO4·12H2O　2.9克

NaCl　8.0克

KCl　0.2克

Tween-20　0.05%　0.5ml

加蒸餾水至1000ml

（3）　稀釋液：

牛血清白蛋白（BSA） 0.1克

加洗滌緩沖液至100ml

或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

（4）　終止液（3M　H2SO4）：

蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。

（5）　底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:

0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml

0.1M檸檬酸（19.2克/L）　 24.3ml

加蒸餾水50ml。

（6）　TMB（四甲基聯苯胺）使用液:

TMB（10mg/5ml無水乙醇）0.5ml

底物緩沖液（PH5.5）　 10ml

0.75%H2O2　 　32μl

（7）　ABTS使用液:

ABTS　0.5mg

底物緩沖液（PH5.5）　 1ml

3%H2O2　 　2μl

（8）　抗原、抗體和酶標記抗體。

（9）　正常人血清和陽性對照血清。

利用

ELISA的基礎是抗原或抗體的固定化和抗原或抗體的酶標記。固相載體表面結合的抗原或抗體仍保留其免疫活性，而酶標抗原或抗體同時保留其免疫活性和酶活性。在測量過程中，測試樣品（其中的抗體或抗原）與固體支持物表面的抗原或抗體發生反應。在固相載體上形成的抗原抗體復合物通過洗滌與液體中的其他物質分離。然后加入酶標抗原或抗體，也通過反應與固相載體結合。此時，固相上酶的量與樣品中被測物質的量成正比。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成有色產物，產物的多少與樣品中被測物質的多少直接相關，因此可以進行定性或定量分析根據顏色深度。由于酶的高催化效率，間接放大了免疫反應的結果，并且該測定方法達到了高靈敏度。 ELISA 可用于測量抗原和抗體。

組成結構

1、 血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、 保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測

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